日产乱码一二三区别视频,无码人妻丰满熟妇区96,亚洲乱亚洲乱少妇无码99P,gogo大胆欧美人体艺杧图片

產(chǎn)品列表 / products

首頁 > 新聞中心 > 分離豬胚胎多能干細胞方法

分離豬胚胎多能干細胞方法

點擊次數(shù):1129 更新時間:2020-03-27

胚胎干細胞從囊胚內(nèi)細胞團分離得到,具有自我更新和分化為3個胚層和生殖細胞的潛能。豬胚胎分離培養(yǎng)體系會改變細胞核移植胚胎、孤雌胚胎和體內(nèi)胚胎多能基因的表達,也會影響豬多能干細胞形成的效率和質(zhì)量。液氮罐

細胞培養(yǎng):用于核移植供體的豬胎兒成纖維細胞從初生豬仔的耳部分離得到。細胞培養(yǎng)基為DMEM,15%胎牛血清,培養(yǎng)溫度為37℃。使用0.25%(W/V)的胰蛋白酶消化,中和后離心200×g。將細胞重懸后并加入等量凍存液(40%DMEM,40%FBS和20%DMSO),貯存在液氮中。

卵母細胞的收集和準備:從屠宰場收集豬卵巢,保存在含有青/鏈霉素的生理鹽水中,運輸溫度32~38℃,3h內(nèi)運回實驗室。采用抽吸法采集卵巢卵母細胞。抽取3~6mm卵泡中的卵母細胞置于15mL離心管中,37℃水浴靜置數(shù)分鐘,待卵母細胞沉降后,用洗卵液洗2遍,顯微鏡下挑取顆粒細胞層達3層以上的卵丘卵母細胞復合物,然后將COCs轉(zhuǎn)入U型皿中培養(yǎng)42~44h,每孔加500μL成熟培養(yǎng)液,每孔放置50~70枚。

孤雌激活和胚胎培養(yǎng):用電融合儀將成熟的卵母細胞進行電激活,將卵母細胞移至2mmol/L6D孵育2.5h。分別將卵母細胞轉(zhuǎn)移到胚胎培養(yǎng)基G1、NCSU23和豬受精卵培養(yǎng)基,24h后記錄卵裂率。3d后,將培養(yǎng)基G1中發(fā)育的胚胎移入囊胚培養(yǎng)基G2。再次培養(yǎng)3~4d后,統(tǒng)計囊胚個數(shù)并收集。

體細胞核移植胚胎培養(yǎng):去除成熟卵母細胞**極體,隨后注入供體細胞。顯微操作后,移入含10%FBS的M199培養(yǎng)基,在38.5℃,5%CO2條件下孵育0.5h,使用電融合儀進行激活處理,移入6D孵育2.5h后,將重組胚胎在NCSU23培養(yǎng)基中培養(yǎng)3d,隨后替換NC-SU23繼續(xù)培養(yǎng)3~5d,觀察胚胎的發(fā)育。

體內(nèi)胚胎的收集:從人工受精的母豬體內(nèi)收集第7~8d的囊胚,所有方法參照Stokes等。每天監(jiān)測母豬的發(fā),將發(fā)日期作為0d,鑒定后的6、12和18h進行人工受精。從子宮沖洗胚胎時使用預熱的含10%FBS的磷酸緩沖鹽溶液。

從豬胚胎分離胚胎多能干細胞:將去除透明帶的囊胚接種到絲裂 素C處理過的小鼠胚胎成纖維細胞飼養(yǎng)層上2~4d,囊胚內(nèi)細胞團在3~5d后出現(xiàn)。待ICM大小適中時,用機械法分離細胞,重鋪到新的飼養(yǎng)層上,并使用不同的豬胚胎干細胞培養(yǎng)基,胚胎多能干細胞克隆每5~7d使用機械法傳代。液氮罐

15611258074
在線咨詢
精品久久久久| 翁止熄痒禁伦短文合集免费视频| 少妇扒开双腿自慰出白浆| 亚洲日韩精品一区二区三区无码| 少妇被多人C夜夜爽爽AV| 老师穿着旗袍肉色丝袜让我玩| 久久久久无码精品国产| 狠狠躁夜夜躁人人爽| 精品一区二区三区无码免费视频| 国精品人妻无码一区二区三区软件| 无码少妇一区二区| 农民人伦一区二区三区| 高级艳妇交换俱乐部小说| 国产一区二区精品久久岳| 熟妇人妻一区二区三区四区| 双乳被老汉揉搓A毛片免费观看| 菠萝蜜视频网站| av无码一区二区三区| 无码国产色欲XXXXX视频| 欧美丰满熟妇XX猛交| 公开高潮当众露出羞耻H| 亚洲精品无码专区在线| 白丝双马尾被疯狂输出| 亚洲 日韩 欧美 综合 热| 日本a级毛片| 久久久久亚洲精品无码网址色欲| 日本不卡一区二区三区| 女局长白白嫩嫩大屁股| 久久久国产精华液2023| 午夜精品久久久久久久| 久久人做人爽一区二区三区| 又色又爽又高潮免费视频观看| 欧美大胆a级视频免费| 日本欧美大码一区二区免费看| 小寡妇高潮流白浆A片| 人妻凌参观1~2樱花动漫| 黄色电影免费看| 宝贝胸罩脱了让我揉你的胸| 无码粉嫩小泬无套在线观看A片| 亚洲欧美日韩久久精品第一区| 久久久精品中文字幕麻豆发布|